組織研磨低溫均質(zhì)儀經(jīng)過大量樣品破碎測試后發(fā)現(xiàn),動物組織樣品相比其他樣品更難破碎,特別是一些內(nèi)臟組織、結(jié)締組織、心臟肌肉組織、肺部組織,一般很難用手工或者常規(guī)組織勻漿儀*破碎。因?yàn)檫@些動物組織樣品一般韌性較大,如果使用手工研磨或者組織勻漿儀,不僅一次處理量太少、易污染且難清洗,處理后的樣品還不夠均勻細(xì)致,達(dá)不到后續(xù)提取RNA等實(shí)驗(yàn)的要求。
組織研磨低溫均質(zhì)儀實(shí)驗(yàn)流程:
1.高溫滅菌預(yù)處理6mm不銹鋼研磨珠;
2.將滅菌處理過的研磨珠與研磨管適配器置入液氮中同時進(jìn)行預(yù)冷處理;
3.將樣品從液氮中取出,在研缽中切割成約4-5mm寬的樣品小塊。
4.在2ml無菌圓底離心管(進(jìn)口)中依次加入:預(yù)冷6mm研磨鋼珠1顆、切好的樣品塊1塊、預(yù)冷6mm研磨鋼珠1顆。
5.確保離心管中有2顆6mm研磨鋼珠和1塊樣品塊后,快速蓋好管蓋,對稱放入預(yù)冷的2.0ml研磨管適配器孔槽中。
6.將適配器固定在組織研磨破碎儀的兩個搖臂上,設(shè)置轉(zhuǎn)速1800rpm,時間120S(胰腺樣品180S),一鍵開始研磨。
8.研磨時間結(jié)束,卸載適配器取出離心管,在管中快速加入裂解液,然后按照后續(xù)RNA提取實(shí)驗(yàn)步驟操作。
組織研磨低溫均質(zhì)儀一次性高速破碎多個內(nèi)臟樣品組織,不僅操作靈活方便,還能安全輕松地進(jìn)行液氮冷凍研磨操作,保證了RNA提取等溫度敏感性后續(xù)實(shí)驗(yàn)的順利進(jìn)行。此外,避免了樣品間的交叉污染,省去了清洗儀器的繁瑣工作,對于樣品量巨大且需要無菌操作的實(shí)驗(yàn),無疑大大提高了效率。