全自動(dòng)核酸提取儀采用磁棒吸附轉(zhuǎn)移核酸純化方式,利用深孔反應(yīng)板和磁棒套,搭配不同種類(lèi)的磁珠法核酸提取試劑,同時(shí)操作1-96個(gè)樣本,從血液、細(xì)胞、組織、病毒等多種樣本中自動(dòng)分離提取純化DNA/RNA。儀器通過(guò)特制的磁棒吸附、轉(zhuǎn)移和釋放磁珠,從而實(shí)現(xiàn)樣本/磁珠/核酸的轉(zhuǎn)移,避免了液體處理過(guò)程,提高了自動(dòng)化程度。
全自動(dòng)核酸提取儀是針對(duì)紛繁復(fù)雜的樣本,每天的核酸提取可以說(shuō)是費(fèi)時(shí)費(fèi)力的工作難題。如果短時(shí)間內(nèi)想穩(wěn)定拿到實(shí)驗(yàn)結(jié)果,那么快速、穩(wěn)定的核酸提取方法就顯得十分重要。
比較常見(jiàn)的提取方法有沉淀法,離心柱法和磁珠法,提取步驟基本類(lèi)似分為裂解、洗滌和洗脫。
全自動(dòng)核酸提取儀需要注意的細(xì)節(jié)較多,一處出錯(cuò)都會(huì)導(dǎo)致結(jié)果的失敗。常見(jiàn)的問(wèn)題主要有產(chǎn)物得率低,產(chǎn)物降解或者試劑殘留。針對(duì)這些問(wèn)題,下文整理給出了具體的應(yīng)對(duì)方法,幫助大家避坑。
1、提取的核酸得率低:
樣品量與試劑的配比要控制在一定范圍,避免超過(guò)裂解能力;
破碎研磨的步驟處理細(xì)節(jié)很重要,一定要充分研磨,這是核酸提取的首要條件;
在洗脫的步驟,使用足量的洗脫液洗脫并充分混勻,避免有團(tuán)塊殘存;
實(shí)驗(yàn)耗材要匹配,如不同的吸附柱或磁珠的核酸吸附能力不同,也會(huì)影響核酸的得率。
2、提取核酸出現(xiàn)降解:
提取的樣品量要符合試劑的配比,盡量控制樣品量達(dá)到合適比例;
每個(gè)步驟都要注意充分的混合均勻,避免團(tuán)塊的殘留影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果;
在洗脫時(shí),時(shí)間過(guò)長(zhǎng)或者溫度過(guò)高,核酸有可能會(huì)降解;
樣本切記不可反復(fù)凍融,提取的樣本要注意在合適的溫度保存,長(zhǎng)期保存盡量-80℃。
3、提取到的核酸純度不夠高,甚至抑制物殘留影響下游實(shí)驗(yàn):
樣本量和裂解液等試劑的配比要盡量控制到合適的范圍;
混合均勻以確保裂解充分和沒(méi)有團(tuán)塊殘留;
晾干的步驟要充分,否則可能會(huì)導(dǎo)致醇類(lèi)等雜質(zhì)的殘留;
磁棒振蕩幅度太小或混合時(shí)間太短,磁珠上有雜質(zhì)殘留會(huì)影響磁珠吸附核酸的能力。